酯酶系列_堿性磷酸酶AKP/ALP測試盒_微量法

測定方法：微量法

產品規格：100管/48樣

注   意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。

測定原理：

在堿性環境中，AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與4-氨基和鐵KCN反應紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過測定510 nm吸光度增加速率，來計算AKP活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。

標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。

酯酶系列_堿性磷酸酶AKP/ALP測試盒_微量法

粗酶液提?。?/p>

1.組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測。

2.細菌或細胞：按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3.血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到510 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；

加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。

注意：空白管和標準管只需測定一次。