羧酸酯酶(CarE)測試盒_ 酯酶系列_分光法

測定方法：分光光度法

產品規格：50管/48樣

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

哺乳動物CarE，也稱脂族酯酶（aliesterase），廣泛分布于組織和器官，屬于Ser水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內源性與外源性物質水解，但不能催化水解乙酰及其類似物。CarE參與脂質運輸和代謝，并且與多種藥物、環境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關，有機磷農藥可結合并且抑制CarE活性。

羧酸酯酶(CarE)測試盒_ 酯酶系列_分光法

測定原理：

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固藍顯色；在450 nm光吸收增加速率，計算CarE活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體30mL×2瓶， 4℃保存；

試劑三：粉劑×2支， 4℃保存，臨用前取1支試劑三，加1.2ml無水乙醇充分溶解；

試劑四：粉劑×2支，-20℃保存，臨用前取1支試劑四，加少量試劑二溶解；

工作液配制：臨用前配制，向1瓶試劑二中，加入溶解后的試劑三和試劑四各1支，充分溶解，過濾，4℃避光保存，可用1周。

樣本的前處理：

1、細菌、細胞樣品制備

收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每200萬細菌或細胞加入400μL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）；12000g 4℃離心30min，取上清液待測。

2、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿；12000g 4℃離心30min，取上清液待測。

3、液體：直接測定。

測定步驟：

1. 分光光度計預熱30min，調節波長到450 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二置于37℃水浴中預熱30 min。

3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入5μL蒸餾水和1000μL試劑二，迅速混勻，于450nm處測定3min內吸光值變化，第10s吸光值記為A1，第190s吸光值記為A2?！鰽空白管=A2-A1

4. 測定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入5μL上清液和1000μL試劑二，迅速混勻，于450nm處測定3min內吸光值變化，第10s吸光值記為A3，第190s吸光值記為A4?！鰽測定管=A4-A3

注意：空白管只需測定一次。